උපරිම PCR ප්රතිඵල සඳහා අවශ්ය කුමක්දැයි සොයා බලන්න

පිරිසිදු විද්යාගාර කොන්දේසි

PCR වලට DNA අණුවක් හඳුනා ගැනීමට හැකියාව ඇති බැවින්, විද්යාගාරයේ දී අඳුරු තත්ත්වයන් පවත්වා ගැනීම වැදගත් වේ. සෑම විටම නැවුම් අත්වැසුම් ඇඳීම, විෂබීජනා වීදුරු භාණ්ඩ, නල සහ පපතේ ඉඟි සහ ස්වාභාවික විසඳුම් භාවිතා කරන්න, වැඩ ආරම්භ කිරීමට පෙර වැඩ කටයුතු පිරිසිදු කරන්න.

නියැදි නියැදිවල ප්රථිපලයක් වශයෙන් ප්රතිඵල ප්රතිඵලය ලෙස තහවුරු කිරීම සඳහා ආකෘති DNA සහ එන්සයිමයෙන් තොරව සෑම විටම පාලන ප්රතික්රියා ඇතුළත් වේ.

බහුතරයක් නිවැරදිව දෝෂහරණය කිරීමට ඉඩ නොදෙන තමන්ගේම විසඳුම් ලබා ගැනීමට බොහෝ දෙනා වග බලා ගන්නවා. DNase සහ RNase-නිදහස් PCR ටියුබ්, වායුගෝල ප්රතිරෝධී පයිපේට් ඉඟි සහ UV ආලෝකය සහිත වාතාශ්රය භාවිතා කිරීම ද ගැටළු අවම කිරීම සඳහා ක්රමවේදයක් ද වේ.

02 රසායනික සංරචක

• කඳවුරු 18 සිට 24 දක්වා තිබේ
• ද්විතියික ව්යුහයක් (එනම්, හිසකෙස් වළළු)
• G / C හා A / T යුගල සමබර බෙදාහැරීම
• 3 අඩි අගයේ එකිනෙකට අනුපූරක නොවේ
• සාමාන්යයෙන් උෂ්ණත්වය සෙල්සියස් අංශක 5-10 ක් පමණ වේ. උෂ්ණත්වයේ උෂ්ණත්වය සෙල්සියස් අංශක 55 ත් 65 ත් අතර වේ.

සුපිරි නිපැයුම් සඳහා වන Tm හොඳම ප්රතිඵල සඳහා සමාන විය යුතුය.

03 ප්රතික්රියා මිශ්ර: සැකිල්ල සහ උදාහරණ

පරමාණුක නයිට්රික් සාන්ද්රණය 0.1 μm හා 0.6 μm / L අතර වේ. DNA සැකිල්ල (මානව, බැක්ටීරියා, ප්ලාස්මිඩ්) මත පදනම්ව අච්චුවේ ප්රමාණය වෙනස් වේ.

ඉතා අඩු අළුත්ම අච්චු සහිතව, වැඩි දියුණු චක්ර සංඛ්යාවක් හෝ උණුසුම් ආරම්භයක් වැනි ප්රතිඵල වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා වෙනත් ක්රමෝපායන් ඇත. නිශ්චිත පර්යේෂණාත්මක තත්වයන් යටතේ ඔවුන් වැඩ කරන බවට වග බලා ගැනීම සඳහා ධනාත්මක පාලක ප්රතික්රියාවක් ඇති නව නියැදි නිතරම පරීක්ෂා කරන්න.

04 ප්රතික්රියා මිශ්ර: එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය

ප්රතික්රියා මිශ්රණයේ MgCl2 සාන්ද්රණය PCR ප්රතිඵලය කෙරෙහි බලපෑම් කළ හැකි අතර වඩාත් ප්රශස්ත ප්රතික්රියා වලදී වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කළ හැකිය. මැග්නීසියම් කැටායනය ඩීඑම්.පී.ටී සමග ද්රාව්ය සංයෝග නිපදවයි. පොලිමරේස් එන්සයිම හඳුනා ගනී.

DNTP වර්ග හතරේ සමාන ප්රමාණයක් ද පොලිමරේස් දෝෂ අනුපාතය අඩු කිරීමට උපකාරී වේ. බිටීන්, BSA, ඩිටර්ජන්ට්, ඩීඑම්එස්ඕ, ග්ලිසරෝල් සහ පීෆොෆොස්සාටේසා වැනි සමහර ආකලන වලට එන්සයිම විශේෂිතතාව හෝ ප්රතික්රියාශීලී කාර්යක්ෂමතාවට බලපෑම් කළ හැකිය.

05 තාප චිකිත්සක වර්ගය

රසායනාගාර උපකරණ සඳහා සාප්පු සවාරියේදී නියත උෂ්ණත්ව තත්ත්වයන් පවත්වා ගෙන යාමේදී සමහර තාප සගයන් වෙනත් ඒවාට වඩා අඩුවෙන් නිශ්චිත බව සිහියේ තබාගන්න.

ඔබ ඉතා සුළු ප්රතික්රියාවකට මුහුණ දෙන විට හෝ උෂ්ණත්වයේ පටු උෂ්ණත්වයක් අවශ්ය වන පාංශු භාවිතයන් සඳහා දිගු කාලීනව ගෙවනු ලබන ලාභදායී ප්රදේශයක් නොවේ.

ඔබ භාවිතා කරන තාප චිකිත්සාව නිවැරදිව ගැලපෙන පරිදි නිර්මාණය කර ඇති තාපාංක ප්රතික්රියා නල, ප්රතික්රියා උෂ්ණත්වයන් ප්රශස්තිකරණයට උපකාරී වේ.

06 සයිකල් සැකසුම්

වැඩිපුරම අස්වැන්නක් ලබා ගත හැකි වනුයේ, සෑම චක්රයක් සඳහාම දිගු කාලය වැඩි කිරීම මගින් වැඩි ආකෘතියක් වැඩි කිරීම සඳහා අඩු එන්සයිමයක් වන්දි ලබා ගැනීමයි. සාමාන්යයෙන්, සෛල 40 කට වඩා අඩුය, ප්රමාණවත් තරම් සාන්ද්රණයකින් යුක්ත මූලද්රව්ය අණු 10 කට වඩා අඩු කිරීමට ප්රමාණවත් තරම් සංකීර්ණ ප්රමානය සඳහා ප්රමාණවත් තරම් එතිඩියම් බ්රෝමයිඩ් ආලේපන ඇග්රරස් ජෙල් මත බැලීමට ප්රමාණවත්ය.