ජාන සමඟ ක්ලෝන කිරීම සඳහා යොමු කර ඇත්තේ කුමක් ද?
අණුක ක්ලෝනකරණයෙහිදී, දෛශිකය යනු ජානමය වශයෙන් වෙනත් ජෛව සෛලයකට මාරු කිරීම හෝ ඇතුළු කිරීම සඳහා වන වාහක ලෙස සේවය කරන DNA අණුවකි. මෙය ප්රතිනිෂ්පාදනය හා / හෝ ප්රකාශනය කළ හැකි ස්ථානයකි. ජාන ක්ලෝන සඳහා අත්යාවශ්ය මෙවලම් අතර වාහකයන් වන්නේ ජෛව විද්යාත්මක තක්සේරුවක් මගින් සංකේතවත් කරන ජෛව විද්යාත්මක තක්සේරුවක් මගින් සංකේත කරන යම්කිසි මාර්කර් ජානයක් ලෙසට නම් ඒවා වඩාත් ප්රයෝජනවත් වේ.
නිශ්චිතවම ක්ලෝන දෛශිකයක් යනු ක්වෝනිං අරමුණු සඳහා විදේශීය DNA කැබැල්ලක් සමඟ වෛරසය, ප්ලාස්මිඩ් හෝ සෛල (උසස් ජීවීන්ගෙන්) ලබාගන්නා DNA වේ. ක්ලෝන දෛශිකයක් ජීවියා තුළ ස්ථීරව පවත්වා ගත හැකි බැවින්, දෛශිකය දෛනිකව ඇතුළත් කිරීම හෝ ඉවත් කිරීම සඳහා ඉඩ සලසන ලක්ෂණ අඩංගු වේ. ක්ලෝනකරණ දෛශිකය තුළට ක්ලෝනනය කිරීමෙන් පසුව, ඩීඑන්ඒ fragment තවත් විශේෂිතව භාවිතා කළ හැකි තවත් දෛශිකයක් තුලට තවත් උප-ක්ලෝන කළ හැක.
ඇතැම් අවස්ථාවලදී බැක්ටීරියා ආසාදනය කිරීමට වෛරස් භාවිතා වේ. මෙම වෛරස් කෙටි කිරීම සඳහා bacteriophages, හෝ fage, ලෙස හැඳින්වේ. සත්ත්ව සෛල තුල ජාන හඳුන්වාදීම සඳහා විශිෂ්ට වාහකයන් වේ. විදේශීය DNA බැක්ටීරියා සෛල තුළට හඳුන්වාදීම සඳහා භාවිතා කරන වඩාත් බහුලව භාවිතා කරන ලද දෛශිකයන් වන ඩී. ප්රතිජීවක ප්රතිරෝධක ජාන බොහෝ විට ප්රතිජීවක පෙට්රි තැටි මත ප්ලාස්මිඩ් ඩීඑන්ඒ ප්රකාශනය සඳහා යොදා ගත හැකිය.
ශාක සෛල තුළ ජාන මාරු කිරීම සාමාන්යයෙන් පස බැක්ටීරියා Agrobacterium tumefaciens භාවිතා කරයි. මෙය සෛලයක් ලෙස ක්රියා කරන අතර විශාල ප්ලාස්මිඩයක් ධාරක සෛලයට ඇතුල් කරයි. ප්රතිජීවක ඖෂධ ඇති විට ක්ලෝන ද්රව්යයේ අඩංගු සෛල පමණක් වර්ධනය වේ.
ක්ලෝන වාහකයන් ප්රධාන වර්ග
වාහකයන් ප්රධාන වර්ග හයන් වන්නේ:
- ප්ලාස්මිඩ්. බැක්ටීරියා සෛල තුළ ස්වයංක්රීයව ප්රතිජනනය කරන ලද චක්රලේඛය. Plasmids සාමාන්යයෙන් සෛලයකට පිටපත් 500-700 ක පිටපත් ප්රමාණයක් සහිත pUC19 වැනි ඉහළ පිටපත් සංඛ්යාවක් ඇත.
- Phage. ලක්ෂණ Bacteriophage lambda ව්යුත්පන්න වේ. සිය ජීව චක්රය කඩාකප්පල් නොකර විදේශීය DNA ආදේශ කළ හැකිය.
- කොස්මිමීඩ්. ප්ලාස්මිඩ සහ ෆැගල් වල ලක්ෂණ එකිනෙකට එකතු වන තවත් චක්රලේඛනයක් වන විස්ති්රොමෝසෝමල් DNA අණුවක්.
- බැක්ටීරියා කෘතිම වර්ණදේහ. බැක්ටීරියා මිනි ෆී ප්ලස්මිඩ් මත පදනම්ව.
- යීස්ට් කෘත්රිම වර්ණදේහ. මෙය ටෙලමොරේ (කෘත්රිම වර්ණදේහවල කප්පාදුවේ අවසානයෙහි ඇති කෘතිම වර්ණදේහයකි), ප්රතිගුණකරණය කිරීමේ මූලාරම්භය, යීස්ට් සෙන්ටිමීටරය (සොහොයුරු හෝ්රොස්ටොසිස් හෝ ඩියාඩ් සම්බන්ධ වන වර්ණදේහයක කොටසක්) සහ තෝරා ගත හැකි සලකුණුකරණයක් යීස්ට් සෛල හඳුනා ගැනීම සඳහා.
මානව කෘතිම වර්ණදේහය. මෙම වර්ගයේ දෛශිකයකි මානව සෛල වලට ජාන සැපයුම සඳහා ප්රයෝජනවත් විය හැකි අතර ප්රකාශන ප්රකාශන අධ්යනය කිරීම සහ මානව වර්ණදේහ ශ්රිතය තීරණය කිරීම. එය ඉතා විශාල DNA කැබැල්ලක් රැගෙන යා හැකිය.
සියළුම ඉංජිනේරුවරුන්ගේ වාහකයන් සතුව ප්රතිගුණකරණය (ප්රති අනුකාරකයක්), ක්ලෝනකරණ අඩවියක් (විදේශීය DNA ආදේශ කිරීම හෝ අත්යාවශ්ය සලකුණුකරණය අවලංගු කිරීම වලක්වන අතර, තෝරාගත් සලකුණක් (සාමාන්යයෙන් ප්රතිජීවක ප්රතිරෝධයක් දක්වන ජානයකි.)