සීමා කිරීමේ එන්සයිම යනු කුමක්ද?

මෙම එන්ඩොකොකැලීස් කැපී පෙනෙන අයුරු

සීමිත එන්සයිම් ගැන ඔබ දන්නේ කෙසේද? මෙම සමාලෝචනය සමඟ ඔවුන් කරන දේ හා ඒවා වැදගත් වන්නේ ඇයි දැයි හොඳින් අවබෝධ කර ගන්න.

සීමා කිරීම එන්සයිම නිශ්චය කිරීම

සීමාකිරීම් එන්ඩොනියුක්ලස් යනු DNA අණුවලින් කපා දැමූ එන්සයිමයේ පන්තියකි. එක් එක් එන්සයිම DNA අණුවෙහි නියුක්ලියෝටයිඩයන්ගේ අනුපිළිවෙල හඳුනා ගනී. එවැනි අනුපිළිවෙලවල් සාමාන්යයෙන් 4 සිට 6 දක්වා පාදක යුගලයක් වේ. අනුපූරක DNA ආන්තරයේ එකම අනුක්රමණය එකම ප්රතිවිරුද්ධයයි.

වෙනත් වචනවලින් කිවහොත්, DNA ස්ථානයේ DNA අණුවක් එකම ස්ථානයේ කපා ඇත.

මෙම එන්සයිම සොයාගනු ලැබේ

බැක්ටීරියා බොහොමයක් විවිධාකාර ආසාදනයක එන්සයිම දක්නට ලැබේ. ඔවුන්ගේ ජෛව භූමිකාව සෛල ආරක්ෂණයට සහභාගි වීමයි. මෙම එන්සයිම "සෛලයට ඇතුල් වන විදේශීය (උදාසීන) DNA" සීමා කිරීම මගින් එය විනාශ කරනු ලැබේ. ධාරක සෛල එහි නිශ්චිත සීමා කරන එන්සයිම සඳහා නිශ්චිත අඩවිවල සිය ඩීඑන්එන් ලයිටින් ඩයිමරයිටින් ඩයිසයිටනය කර ඇති සීමාකිරීමේ ක්රමයක් ඇත. විවිධ නියුක්ලියෝටයිඩ අනුපිළිවෙලට වඩා 100 කට වඩා හඳුනා ගන්නා ලද එන්සයිම 800 ට වඩා සොයාගෙන ඇත.

ජෛව තාක්ෂණවේදය තුළ භාවිතය

පුද්ගලයන්ට අතරින් කොටස්වල දිග වෙනස්කම් අධ්යයනය කිරීම සඳහා DNA අණුවලට කුඩා කැබලිවලට කපා දැමීම සඳහා ජෛවතාක්ෂණයේ සීමා කිරීම් එන්සයිම යොදා ගනී. (සීමා කිරීම් බිංදරය දිග බහුරූපතා - RFLP). ඒවා ජාන ක්ලෝන සඳහා යොදා ගනී.

ජාන නිශ්චිත ස්ථානවල සීමා සහ බෙලහීන බෙදීමේ රටාවන් තුළ පුද්ගලයන්ට හෝ කණ්ඩායම් වල විශේෂිත වෙනස්කම් ඇති බව නිශ්චය කිරීම සඳහා RFLP තාක්ෂණය භාවිතා කර ඇත.

මෙම අද්විතීය ප්රදේශ පිළිබඳ දැනුම ජාන ප්රතිබිම්බනය සඳහා පදනම වේ. මෙම සෑම ක්රමයක්ම DNA කොටස් වෙන් කිරීම සඳහා ඇග්රරස් ජෙල් ඉලෙක්ට්රෝෙටෝෙපෝෙසස් භාවිතය මත රඳා පවතී. ටීස් පදනම, බෝරික් අම්ලය සහ EDTA වලින් සමන්විත TBE බෆරයක් යනු බහුලවම DNA අණුවක් පරීක්ෂා කිරීම සඳහා ඇග්රරස් ජෙල් විදමෝචරේෂණ සඳහා යොදා ගනී.

සීමා කිරීමේ එන්සයිම් වර්ග

සීමිත එන්සයිම තුනක් තිබේ. වර්ගය I හඳුනාගැනීමේ ස්ථානයේ සිට 1000 හෝ ඊට වැඩි පාදක යුගල ලෙස අහඹු ස්ථානවලදී DNA ආවරණය කරයි. වර්ග III මගින් අඩවියේ මූලික භාජන 25 ක් පමණ කපා හැරේ. වර්ග I සහ III වර්ගීකරණයට ATP අවශ්ය වන අතර ඒවායේ උප ඒකක කිහිපයක් සහිත විශාල එන්සයිම විය හැක. ටයිටැනික් ආකාර දෙකක ජෛව තාක්ෂණ විද්යාවෙහි භාවිතා වන වර්ග II එන්සයිම, ATP අවශ්යතාවය නොමැතිව පිළිගත් අනුක්රමය තුළ DNA ඉවත් කර ඇති අතර කුඩා හා සරල වේ.

II වර්ගයේ බන්ධන එන්සයිම ඒවා හුදකලා වූ බැක්ටීරියා විශේෂයන්ට අනුව නම් කෙරේ. උදාහරණයක් ලෙස, EcoRI එන්සයිමය E. coli වලින් හුදකලා විය. මහජනතාවගෙන් බොහෝ දෙනෙක් ඊ.සී. කෝපයෙන් පැතිර යන ආහාර පිළිබඳව හුරුපුරුදු ය.

II වර්ගය සීමා කරන එන්සයිම, එකිනෙකට වෙනස් හඳුනාගැනීමේ අනුපිළිවෙලේ එක් කෙළවරක ආසන්න වශයෙන් පිළිගත් අනුක්රමයෙහි කේන්ද්රය හෝ පොටවල් දෙකම කපන ලදදැයි යන්න අනුව විවිධ වර්ගයේ කප්පාදුවක් ජනනය කළ හැකිය.

පැරණි කප්පාදුව කිසිදු නියුක්ලියෝටයිඩ විවරයක් සහිත "නිශ්චිත කඩු" උත්පාදනය කරනු ඇත. මෙම අක්ෂරයෙන් "ඇලෙනසුලු" හෝ "සංසන්දක" නිමාවක් ඇති කරයි. DNA ප්රතිඵලයක් වශයෙන් ඇති සෑම කොටසක්ම වෙනත් කොටස් වලට අනුකූලව වැඩිවීමක් දක්නට ලැබේ. ප්රතික්රියාකාරක DNA සහ ප්රෝටීන සෑදීම සඳහා අණුක ජාන විද්යාව සඳහා ප්රයෝජනවත් වේ.

මෙම DNA ආකෘතිය කැපී පෙනෙන ලෙස එකිනෙකට බැඳී නොතිබූ දෙකක් හෝ ඊට වඩා වැඩි විවිධාකාරවල ලිවීමේ (එකට බැඳීම) මගින් නිෂ්පාදනය කරයි.