DNA අනුකමණය ද පදනම් මූලද්රව්යයක් තරම් ප්රමාණකින් වෙනස් වන DNA අණුවක් වෙන් කිරීම සඳහා ජෙල් ඉලෙක්ට්රෝෆෝරෝසිස් භාවිතා කිරීමේ හැකියාව මත රඳා පවතී.
DNA අනුකලනය
1970 ගණන්වල අග භාගයේදී දීර්ඝ DNA අණුවක් සඳහා DNA අනුක්රමික ක්රම දෙකක් නිර්මාණය කරන ලදී. මේවා සanger (හෝ ඩිඩේක්සි) ක්රමය සහ මැක්ස්ම්-ගිල්බර්ට් (රසායනික ලක්ෂණ) ක්රමයයි. මැක්සාම්-ගිල්බට් ක්රමය පදනම්ව ඇත්තේ රසායනික ද්රව්ය මගින් නියුක්ලියෝටයිඩ-විශේෂිත බෙදීම් මතය. ඔලිගුකුලේටයිඩයන් අනුක්රමණය කිරීම සඳහා වඩාත් සුදුසු වේ. (කෙටි නියුක්ලියෝටයිඩ බහු අවයවක, සාමාන්යයෙන් කුඩා භාජන 50 ට වඩා කුඩා). සන්ගර් ක්රමය වඩාත් බහුල ලෙස යොදා ගැනේ. එය තාක්ෂණික වශයෙන් භාවිතයට පහසු වන බව ඔප්පු වී ඇති අතර PCR ආක්රමණයත් , තාක්ෂණයෙන් ස්වයංකරණයත් සමඟ, සමහරක් සම්පූර්ණ ජාන ද ඇතුලුව DNA වල දිගු කෙටීම් වලට සරිලයි. මෙම තාක්ෂණය PCR දිගු ප්රතික්රියාවලදී ඩිඩියෝසිනුක්ටොසයිටයිඩ මගින් දාම අවසානය මත පදනම් වේ.
Sanger ක්රමය
Sanger ක්රමය තුළ විශ්ලේෂණය කරන ලද DNA කෙඳි සැකිලි ලෙස භාවිතා කරනු ලබන අතර, PCR ප්රතික්රියාවෙන් DNA DNA පොලිමරේස් භාවිතා කරනු ලබන්නේ උදාහරණ ලෙසය.
විවිධ PCR ප්රතික්රියාකාරක මිශ්රණ හතරක් සකස් කර ඇති අතර ඒවා එක් එක් නියුක්ලියෝටයිඩ හතරක (ඩී. එන්. පී. පී.) ඩීඩොක්සිනුකොසයිඩ ට්රයිපොස්ෆේට් (DNDTP) නිශ්චිත ප්රතිශතයක් (ATP, CTP, GTP හෝ TTP) අඩංගු වේ. නව ඩීඑන්ඒ නූල් වල සංයුතිය අඛණ්ඩව අක්රිය වී ඇති අතර එම කාලය තුළ එම ඇනෙලොග් වලින් එකක් ඇතුළත් වේ.
එක් එක් PCR ප්රතික්රියාව අවසන් වනුයේ DNA ප්රතික්රියා වල විවිධ දිගු මිශ්රණයක් අඩංගු වන අතර එම ප්රතික්රියාව සඳහා ඩයිඩොක්සයිඩ් සහිත නියුක්ලියෝටයිඩය සමඟ අවසන් වීමයි. ජෙල් ඉලෙක්ට්රෝෙටෝෙපෝසයිස් පසුව ෙවනම මංතීරු හතරක පතිවින්දන හතරක් ෙවන් කිරීම සඳහා ෙයොදාෙගන ඇති අතර ඒවාෙය් නියුක්ලියෝටයිඩය සමඟ අවසන් වන අණු වල දිග අනුව මුල් ආකෘතිය නිශ්චය කිරීම.
ස්වයංක්රීය Sanger ප්රතික්රියාවකදී, විවිධ වර්ණ ප්රතිදීප්ත ලේබල හතරකින් ලේබල් ආලේප කරනු ලැබේ. PCR ප්රතික්රියා, විවිධ ඩයිඩොක්සි නියුක්ලියෝටයිඩ්වල දක්නට ලැබේ. කෙසේවෙතත්, ඊළඟට, ප්රතික්රියා මිශ්රණ හතර ඒකාබද්ධ කර ජෙල් එකක මං තීරුවකට යොදන ලදි. එක් එක් කැබැල්ලේ වර්ණය ලේසර් කදම්භයකින් හඳුනා ගැනේ. තොරතුරු එකතු කරනු ලබන්නේ එක් පාටක් සඳහා ඉහළම වර්ණ පෙන්වන ලද වර්ණාලේඛන උත්පාදනය කරන ලද පරිගණකයකි. මෙම සැකිල්ලේ DNA අනුක්රමය තීරණය කළ හැකිය.
සාමාන්යයෙන් ස්වයංක්රියව අනුක්රමික ක්රමය අනුපිළිවෙලින් අනුපිළිවෙලක් සඳහා පමණක් අනුපිළිවෙලට උපකාරී වේ. කෙසේවෙතත්, විශාල ජාන වල සම්පූර්ණ අනුපිළිවෙලවල් ලබාගත හැකි අතර, ප්රීමා ඇවිදිං සහ ෂෝට්ගුන් අනුපිළිවෙල වැනි පියවර ක්රම ක්රම යොදා ගනිමින් සමස්ත ජානමය සාධක ලබා ගත හැකිය.
නිදසුනක් ඇවිදීමේදී , විශාල ජානයක හැසිරවිය හැකි කොටස සෑන්ර්ජර් ක්රමය භාවිතා කිරීමෙන් අනුක්රමිකව යෙදී ඇත. නව මැලියම් නිපදවනුයේ අනුපිළිවෙලේ විශ්වසනීය කොටසකිනි. මුල් ප්රතික්රියාවෙන් නොපෙනෙන ජාන කොටස අනුපිළිවෙල දිගටම කරගෙන යාම සඳහා භාවිතා කරනු ලැබේ.
ෂොට්ගන් අනුපිළිවෙල අනුව අහඹු ලෙස කොටස් කිරීමේ DNA කාණ්ඩයේ වඩාත් සුදුසු (කළමණාකරණය) ප්රමාණයේ කොටස් කපා, එක් එක් කැබැල්ලක අනුපිළිවෙල අනුපිළිවෙලින් හා කොටස් අච්චු මත පදනම්ව සකස් කිරීම සිදු කරයි. මෙම ක්රමවේදය අතිච්ඡාදනය වන කොටස් සකස් කිරීම සඳහා පරිගණක මෘදුකාංග භාවිතය මගින් පහසු කර තිබේ.