TAE buffer එකක් සෑදීමේ ආකාරය ඉගෙන ගන්න

DNA අණුව අධ්යයනය කිරීම සඳහා මෙම බෆරර් භාවිතා වේ

TAE බෆරයක් යනු Tris පදනමක්, ඇසිටික් අම්ලය සහ EDTA (Tris-acetate-EDTA) වලින් සමන්විත විසඳුමක් වේ. ඓතිහාසිකව PCR ආම්පන්නය, DNA පවිත්ර කිරීමේ ප්රොටෝකෝලය හෝ ඩී.එන්.කේ. ක්ලෝනින් පරීක්ෂණ මගින් DNA ආම්ලික විශ්ලේෂණයන් තුළ ඇග්රරස් ජෙල් ඉලෙක්ට්රෝෙටෝෙපෝෙසස් සඳහා භාවිතා කරන වඩාත් බහුලවම බෆරයක්.

මෙම බෆරයට අඩු අයනික ශක්තියක් හා අඩු බෆල් කිරීමේ හැකියාව ඇත. DNA (> 20 kb) කෑලි ඉලෙක්ට්රෝන අධෝරෝසනය සඳහා වඩාත් ගැලපෙන අතර නිතර නිතර ප්රතිස්ථාපනය කිරීම හෝ දිගු (> 4 පැය) ජෙල් ධාවන කාලය සඳහා ප්රතිස්ථාපනය කළ යුතුය.

ඒ සමඟම, ඔබ බෆරයේ කාණ්ඩ කිහිපයක් සලකා බැලීමට අවශ්ය විය හැකිය.

බෆරයක් සෑදීමට පහසු වන අතර, පියවර ඉක්මනින් සිදු කළ හැකි අතර, එක් වරකට වැඩි කණ්ඩායමක් සෑදීමේදී විශේෂයෙන් කාලය ගත කිරීම හෝ අත්හැරීම දුෂ්කර නොවේ. පහත දැක්වෙන උපදෙස් භාවිතා කිරීමෙන් එය TAE බෆරය සෑදීම සඳහා විනාඩි 30 ක් ගතවේ. මෙන්න මෙහෙමයි:

EDTA කොටස් තොගය සකස් කිරීම

EDTA (එතිලින්ඩීනියම් ටේට්රැසියෙටික් අම්ලය) ද්රවණය කලින් සූදානම් වේ. PH අගය 8.0 පමණ වන තෙක් EDTA සම්පූර්ණයෙන්ම විසඳුමක් නොලැබේ. මිලිලීටීටර 500 මිලිලීටර ද්රාවණය සඳහා 0.5 M EDTA සඳහා ඩීඩෝඩියම් ලවණ ග්රෑම් 93.05 ග්රෑම් කිරණ (FW = 372.2) කිරා මැන බලන්න. මිලිලීටර 400 ක් තුල දියර කළ ජලය සෝඩියම් හයිඩ්රොක්සයිඩ් (pH) සමඟ pH අගය වැඩි කිරීම. මිලිලීටර 500 අවසන් පරිමාව සඳහා විසඳුම ඉහළට.

TAE කොටස් තොගයක් ගොඩ නැගීම

Tris පදනමෙහි සාන්ද්රිත (50 x) තොග විසඳුමක් සාදන්න Triris base ග්රෑම් 242 (FW = 121.14) බරින් ඩීසයිඩ් ජලය මිලිලීටර් 750 ක් තුළ විසුරුවා හරිමින් එය විසුරුවා.

ප්රවේශමෙන් ග්ලැසියර අම්ලය මිලි ලීටර් 57.1 ක් සහ 0.5 M EDTA මිලිලීටර් 100 (pH 8.0) එකතු කරන්න. ඊට පසු, විසඳුම ලීටර් 1 අවසන් පරිමාවකට සකස් කරන්න. මෙම තොග ගබඩා කාමර උෂ්ණත්වයේදී ගබඩා කළ හැක. මෙම බෆරයේ pH අගය සකස් කර නොමැති අතර 8.5 ක් විය යුතුය.

TAE හි ක්රියාකාරී විසඳුමක් සකස් කරන්න

1x TAE බෆරයේ ක්රියාකාරී විසඳුම සෑදීම් ​​ජලයෙන් 50x කින් තොග විසඳුම් ස්වල්පයක් විසුරුවා හරිනු ලැබේ.

අවසන් ද්රාවිත සාන්ද්රණය 40 mM වේ. Tris-acetate සහ 1 mM EDTA. බෆර දැන් ඇග්රරස් ජෙල් ක්රියාත්මක කිරීම සඳහා සූදානම් වේ.

බෆර් සඳහා ඔබට අවශ්ය දේ

TAE බෆරය සෑදීම සඳහා ඉක්මන් හා සරල උපදෙස් මාලාවක් අවශ්ය වන බැවින් එය සඳහා අවශ්ය ද්රව්ය සංඛ්යාව අතිරික්තය. ඔබට EDTA ඩීඩේඩියම් ලවණ, Tris පදනම සහ ග්ලැසියර ඇසිටික් අම්ලය අවශ්ය වේ.

සුදුසු පරිදි පරිවාරක කිරීම pH අගය හා ක්රමාංකන ප්රමිතීන් අවශ්ය වේ. ඔබට මිලිලීටර 600 ක් සහ මිලිලීටර් 1500 ක බෝකට හෝ කොළ සහ උපාධි සිලින්ඩර් අවශ්ය වේ. අන්තිමේදී, ඔබ ඩයිනිං ජලය, බ්ලාස්ටික් සහ ප්ලාස්ටික් ඇඹරීමට අවශ්ය වනු ඇත.

ඔතන

ඔබේ නිවස වැනි පාසැල් වෙබ් අඩවියක්, වැඩ වෙබ් අඩවියක් හෝ වෙනත් ස්ථානයක් ඔබ බෆරයක් කිරීමට සැලසුම් කරන්නේ කොහේද? TAE බෆරය සඳහා ඉහත ද්රව්ය සියල්ල ඔබ සතුව ඇති බවට වග බලා ගැනීමට පෙර ඉන්වෙන්ටරි පරීක්ෂා කරන්න.

ඔබට ද්රව්ය සඳහා ගෙවීමට සිදු නොවන්නේ නම්, ඔබගේ නිවසේ බාහිර බාහිර පෙනුම නිර්දේශ කිරීම සඳහා නිර්දේශ කිරීම. ඔබට පහසුවෙන් මාර්ගගතව අවශ්ය ද්රව්ය හෝ ඔවුන් වෙනුවෙන් විශේෂිත සාප්පුවක් වෙතට පහසුවෙන්ම ඇණවුම් කළ හැක.