මෙම ප්රතිශක්තිකරණ රසායනික පැල්ලම් බෆරය සෑදීමේ ආකාරය
පොස්ෆේට් බෆරේෂන් සේලයින් (PBS) යනු රසායනික ද්රාවණය සඳහා බහුලව භාවිතා වන බෆරල් විසඳුමක් වන අතර එය බොහෝ විට ජීව විද්යාත්මක පර්යේෂණ සඳහා යොදා ගනී. PBS යනු සෝඩියම් හයිඩ්රජන් ෆොස්ෆේට්, සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් සහ සමහර අවස්ථාවල පොටෑසියම් ක්ලෝරයිඩ් හා පොටෑසියම් ඩයිඩ්රොජන් පොස්පේට් අඩංගු ජලීය ලුණු විසඳුමක් වේ.
ප්රතිශක්තික රසායනික පැල්ලම්
ප්රතිශක්තිකරණ රසායනය යනු පටක අංශුවල සෛල තුළ ප්රෝටීන් වැනි ප්රතිදේහ හඳුනාගැනීමේ ක්රියාවලිය ජීව විද්යාත්මක පටකවල ප්රතිගාමිත්වයට විශේෂයෙන් බන්ධනය වන ප්රතිදේහ මූලධර්මයයි.
Imunohistochemical staining ක්රමයක් නම් Immunofluorescent පැල්ලම් කිරීමයි.
ප්රතිදේහ ප්රතිශක්තිකරණ බන්ධන ක්රියාවලියේ ප්රතික්රියාවලදී ප්රතිදේහ සමඟ ප්රතිබද්ධිතව ඇති විට ප්රතිදේහජනක ලෙස පෙනේ. මෙම ක්රියාවලිය ප්රත්යාස්ථ අන්වීක්ෂයක් යටතේ නිශ්චිත තරංග ආයාමයක් මගින් විචිත්ර ආලෝකය මගින් සක්රීය කර ඇත.
විසඳුම්වල අෂ්ටාරක්ෂාව හා අයන සාන්ද්රණය මිනිස් සිරුරට ගැලපේ.
PBS සඳහා වට්ටෝරුව
ඔබට ක්රම කිහිපයකින් PBS සකස් කළ හැකිය. විවිධ සූත්රයන් ඇත. ඒවායින් සමහරක් පොටෑසියම් අඩංගු නොවේ. අනෙක් අය කැල්සියම් හෝ මැග්නීසියම් අඩංගු වේ.
මෙම වට්ටෝරුව සාපේක්ෂ වශයෙන් පහසු ය. එය 10X PBS තොග විසඳුමක් (0.1M) වේ. කෙසේ වෙතත්, ඔබ ද 1X කොටස් විසඳුමක් සෑදිය හැකිය, නැතහොත් මෙම 10X වට්ටෝරුව සමඟ ආරම්භ කර 1X එය තනුක කර දමන්න.
මුළු ක්රියාවලිය මිනිත්තු 10 ක් ගතවේ.
ට්වීන එක් කිරීමට විකල්පයක් ද සපයයි.
PBS Buffer කිරීමට ඔබට අවශ්ය වනු ඇත
- සෝඩියම් ෆොස්ෆේට් මොනොසැසික් (නිර්ජලීය)
- සෝඩියම් ෆොස්ෆේට් ඩයිබාබික් (නිර්ජලීය)
- සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ්
- බෝට්ටු සහ බර බෝට්ටු
- චුම්බක මැෂිමයර් හා අවපීඩනය
- PH අගය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා pH අගය තීරණය කිරීම හා සුදුසු විසඳුමක්
- 1L පරිමාමිතික කුට්ටි
- ට්වීන 20 (විකල්ප)
පොස්පේට් බෆ්රිඩ් සලේ (PBS) සාදා ගන්නේ කෙසේද
10.9 ග්රෑම් නිර්ජලීය සෝඩියම් ෆොස්පේට් ඩයිබාස්ක් (Na2HPO4), 3.2g නයිට්රිඩියම් සෝඩියම් ෆොස්ෆේට් මොනොබැසික් (NaH2PO4) සහ 90 ග්රෑම් සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් (NaCl) කිරා මැන බලන්න.
1L ආසවනය කරන ලද ජලය තුළ දිය යුතුය.
PH අගය 7.4 ට ගැලපීම සහ 1L අවසානයේ අවසන් විසඳුම සෑදීමට.
අවශ්ය නම් pH අගය භාවිතා කිරීමට පෙර 10X දිරායාම.
5LL Tween 20 1L විසඳුමකට එකතු කිරීමෙන් PBS විසඳුම් 0.5% Tween 20 ක් අඩංගු වේ.
PBS බෆර් සෑදීම සඳහා ඉඟි
ඔබ PBS විසඳුම සෑදීමෙන් පසුව කාමර උෂ්ණත්වයේ දී බෆරයේ ගබඩා කරන්න.
නිර්වින්දන නොවන ප්රතික්රියා ආදේශ කළ හැකි නමුත් එක් එක් ජල අණු සඳහා එක් එක් සුදුසු ස්කන්ධ නැවත නැවත ගණනය කිරීමට සිදු වනු ඇත.
පොස්පේට් බෆ්රිඩ් සලේ (PBS) භාවිතය
බොහෝ සෛල වලට සමස්ථානික නොවන අතර පොස්පේට් බෆරයට සංෙයෝග බොහෝමයක් භාවිතා කරයි. ද්රාවණය සඳහා ද්රාවණය භාවිතා කළ හැකි අතර එය බොහෝවිට සෛල බහාලුම් සේදීම සඳහා යොදා ගනී. නිදසුනක් ලෙස පදාර්ථය සඳහා ප්රෝටීන්-ප්රෝටීන් අවට ජල අණු ව්යුත්පන්න කරනු ලබන බැවින් වියළි ජෛව අණු අළෙවිය සඳහා විවිධ ක්රම වල PBS භාවිතා කළ හැක. එය "වියළී" සහ ඝන පෘෂ්ඨයකට නිරාකරණය කරනු ලැබේ.
සෛල විනාශ කිරීම වැළැක්වීම සඳහා pH අගය ස්ථාවර හා ස්ථාවර වේ.
සංයෝගයට බන්ධනය වන ජල තුනී පටලයක් denaturacija හෝ වෙනත් කොන්ෆේෂන්ට් වෙනස්කම් වළක්වයි. එම කාර්යය සඳහා කාබොනේට් බෆරර් භාවිතා කළ හැකි වුවද අඩු කාර්යක්ෂමතාවයකින් යුක්ත වේ.
පැල්ලම් ඇල්සිරිටීම්වලදී ප්රෝටීන් වර්ණ ගැන්වීම ගණනය කිරීමේ දී වර්ණාවලියක් භාවිතා කිරීමට PBS භාවිතා කළ හැකිය.